体外使用Cas9系统用于靶向克隆基因组片段（几百kb）

2015年的时候看到这样篇论文，了解到Cas9可以进行体外酶切。

清华大学生命科学学院朱听研究员课题组在Nature Communications期刊上提前发表了题为《CATCH技术实现大型基因簇一步法靶向克隆》（Cas9-Assisted Targeting of Chromosome segments CATCH enables one-step targeted cloning of large gene clusters）的研究论文，在体外首次实现了利用Cas9系统实现长达数百kb的一段基因组片段的精准克隆技术研究取得突破性进展。

在现代生物学多个领域中，在基因工程、分子生物学以及遗传学研究中均广泛应用分子克隆技术。然而，在传统聚合酶链式反应（PCR）技术中存在明显局限性：其无法一次性扩增超过15kb长度的目标片段；此外，在细菌等微生物中的传统限制性核酸内切酶仅识别约6至8个碱基序列作为切割位点，并且难以实现对生物基因组的特异性编辑。因此，在实际应用中往往面临阳性率低、操作步骤复杂以及成本高等问题。近年来随着CRISPR系统的发展，在细菌等微生物中发现了一种能够实现外源序列特异性识别和有效切割的技术；基于此原理科学家们开发出了一系列基因编辑工具、基因表达调控工具以及体内成像工具等创新技术。然而目前对其在体外环境下的应用报道仍然较为匮乏。朱听课题组通过使用体外转录制备的s